尊龙凯时提供的人B细胞淋巴瘤OCILy19细胞培养指南，旨在帮助科研人员高效、安全地进行细胞培养和管理。

一、细胞培养条件

细胞名称：人B细胞淋巴瘤OCILy19

生长特性：该细胞系特征为悬浮生长。

冻存条件：使用无血清冻存液。

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S。

传代方法：首次建议以1:2比例进行传代。每两天更换培养液。

备注：使用无菌离心管收集培养基以作过渡对比培养。如效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完整培养基。

二、细胞处理及培养

收到细胞后，应快速培养至良好状态，并用完全培养液灌满瓶口以确保细胞稳定。初次处理时，使用75%酒精对瓶外进行消毒。然后将细胞放入37°C、5% CO2的培养箱中静置3-4小时。显微镜下观察细胞生长情况，并进行拍照记录（最好包括40x、100x、200x每种倍率各一张）。最初三天的照片为售后服务的重要依据，如无照片则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，将培养液转移至离心管，留下5ml完全培养基在37°C、5% CO2环境中继续培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS轻轻清洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液，置于37°C培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若大部分细胞变圆并脱落，迅速添加5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后，吸出悬液至15ml离心管中，在1000rpm条件下离心5分钟，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 按照1:2的比例分瓶传代，分别补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37°C、5% CO2的培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖80%培养瓶面积时，弃去培养液并用PBS清洗。
2. 加入约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞变圆后，用5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中并离心。
3. 弃去上清后，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液，混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80°C冰箱中，若后期要转入液氮罐，需在-80°C保存超过24小时后转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护用具），快速置入37°C水浴中解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将解冻的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，进行离心。
3. 弃去上清，重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放于37°C、5% CO2的培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，某些细胞可能会因贴壁不牢而脱落，属于正常现象。如细胞脱落情况较严重，请将所有培养液收集至离心管中，进行离心，并按上述步骤处理。

五、售后条款

若细胞出现问题，可能的重发条件包括：

1. 运输过程中细胞丢失、瓶身破损或严重要漏液。
2. 细胞污染问题需在收到产品48小时内反馈真实实验结果，核实后可重发。
3. 常温发货细胞静置24小时后或干冰发货细胞复苏后24小时未存活需提供照片，以判断是否重发。

如因客户原因造成的细胞污染或操作不当等情况，不予重发。若在收到后的2天内未告知问题，则视为产品合格。

如需进一步了解尊龙凯时的产品与服务，请随时联系我们，期待为您提供全面的科研支持！