尊龙凯时提供的SV40转染人成骨细胞HFOB119培养说明书，旨在为您的细胞培养提供详细指导，确保细胞生长状态良好。

一、细胞培养条件

细胞名称：SV40转染人成骨细胞HFOB119

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM/F12 + 0.3 mg/ml G418 + 10% FBS

传代方法：初次建议以1:2比例进行传代；每两天更换培养基。

备注：用无菌离心管收集培养基以便进行对照实验。如对照培养效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理与培养

收到细胞后，培养至良好状态后，用完全培养液灌满细胞瓶并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后将其放入335℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。观察细胞生长情况并拍摄不同倍数的照片（最好拍摄40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞浓度未超过80%时，将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基并放入335℃、5% CO2孵育；如果细胞密度超80%，即可按以下步骤进行传代：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入培养箱消化1-2分钟，观察细胞状态；若细胞大部分变圆并脱落，迅速进行以下步骤。
3. 轻敲培养瓶，加入5ml以上完全培养基终止消化。
4. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清，添加1-2ml完全培养基重新悬浮。
5. 按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，然后放入335℃、5% CO2的培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，倾斜观察细胞状态；当细胞收缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃上清，沉淀细胞后加入1ml尊龙凯时的无血清冻存液混匀，转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后续要转入液氮罐，需在-80℃保存24小时后再转入液氮。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），迅速置于335℃水浴中解冻，直至管内无结晶，然后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟。
3. 弃上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放入335℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 次日更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，某些细胞可能会脱落，这是一种正常现象。如果脱落较多，可按如下方法处理：将培养瓶内的所有培养液收集于离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养；添加胰酶1-2ml轻轻吹打后，消化1-2分钟，加入5ml完全培养基终止反应，再进行离心，按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最终放入335℃、5% CO2培养箱培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发情况及标准

1. 如细胞运输过程中出现损失、瓶身破损或培养液严重漏液，免费重发。
2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供实验结果，经核实后重发。
3. 常温运输的细胞静置24小时后或干冰运输细胞复苏后24小时，大多数细胞未存活（需提供真实清晰照片），背景符合重发条件。
4. 干冰运输的细胞复苏后24小时出现污染，符合重发条件。
5. 若细胞活力问题，请在收到产品7天内提供实验结果，通过台盼蓝染色法验证细胞活力，符合条件后重发。
6. 收到细胞当天以及第2、3天请拍照，3天内未告知视为合格。如4-7天内出现问题，并提供相关照片及步骤，通过技术人员判定责任后可重发。

2）细胞问题不予重发的情况

1. 客户造成的细胞污染，不予重发。
2. 因客户不正确操作导致细胞状态不佳，不予重发。
3. 非推荐培养体系造成细胞状态不佳，不予重发。
4. 细胞状态欠佳且未提供培养前3天的照片，不予重发。
5. 细胞处理不当，不予重发。
6. 收到细胞后2天内未反馈，不予重发。
7. 具体情况另行情况而定。

选择尊龙凯时的细胞产品，享受专业的服务与支持，确保您的实验顺利进行。