尊龙凯时小鼠纤维肉瘤细胞MCA-205的培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS

传代方法：首次建议1:2传代

传代情况：每2天更换培养基

备注：使用无菌离心管收集培养基进行对比培养。如果对比效果不理想，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理说明

收到细胞后，先培养至良好状态，再用完全培养液填满瓶子并封好瓶口是最佳的运输方式。接收细胞时，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后转移至超净台进行无菌操作。然后，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定状态后再进行操作。使用显微镜观察细胞生长情况，并对不同倍数进行拍照保存（最佳为40x,100x,200x各一张）。前三天的照片是重要的售后参考依据，如果未提供照片，则默认收到细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，将瓶装完全培养液收集至离心管中，留出5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱培养。如果细胞密度超过80%，进行以下传代步骤：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，在37℃培养箱消化1-2分钟，然后观察细胞消化情况，若细胞大部分呈现圆形并脱落，迅速操作台处轻敲几下培养瓶，然后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以确保其完全脱落后吸出，再将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，添加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞状态，待细胞变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，若后期需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请戴好防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直到冻存管内无结晶，随后用75%酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管内的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀细胞后用5ml完全培养基重悬，接种于T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养；
4. 次日更换为新鲜完全培养基，继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中容易脱落，这是正常现象。请收集所有培养液至离心管，1000RPM离心5分钟后，收集上清进行过渡培养（后期对比培养）。再加入1-2ml胰酶，轻轻吹打以重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应，随后再次离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。最后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新完全培养基至5-8ml/瓶，置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1. 细胞问题重发条件：
   1. 细胞在运输途中出现问题，如丢失、瓶身破损或培养液严重渗漏，可申请重发；
   2. 若细胞污染问题，请在收到产品48小时内反馈真实实验结果，经核实后可重发；
   3. 常温发货的细胞在静置24小时后，干冰发货的细胞在复苏后24小时内若未存活（需提供真实清晰的状态照片），可重发；
   4. 干冰发货的细胞在复苏后24小时内或常温发货的细胞在静置4小时内未开封且出现污染者，可重发；
   5. 关于细胞活性问题，需在收到产品7天内提供真实实验结果进行鉴定，如确认则可重发；
   6. 收到细胞当天及后两天请拍照，三天未反馈则视为产品合格，若4-7天内出现问题，需提供前3天照片及相关操作记录，以便由技术人员判定责任并决定重发。
2. 细胞问题不予重发条件：
   1. 客户自行造成的细胞污染不可重发；
   2. 客户不正确操作导致的细胞状态不佳不可重发；
   3. 未使用尊龙凯时推荐的培养体系导致细胞状态不佳不可重发；
   4. 细胞状态不佳且未提供培养前3天照片不可重发；
   5. 细胞在培养途中经其他处理不可重发；
   6. 收到细胞2天内未反馈的不可重发；
   7. 具体情况视客户反馈而定。