产品概述 衍生化技术旨在提高生物样本中目标分子的可检测性，从而增强检测器对目标物质的响应。在弱碱性环境中，OPA和3-MPA能够与氨基酸中的羰基和氨基发生反应，生成荧光衍生物。通过紫外光激发后，这些衍生物会发射出比激发光波长更长的荧光。荧光的强度与氨基酸的浓度成正比，因此可以通过荧光强度计算样品中氨基酸的含量。该技术具有快速测定、高准确度和高灵敏度的特点，适用范围广泛，是生物医疗领域的理想选择。 

货号名称：SDK1010氨基酸衍生化试剂盒（OPA法，不含标准品）
规格：25T/50T
储存条件：2-8℃
注：欲了解更多信息，请联系网站负责人。

组分与实验步骤

1. 流动相A的配制

取适量超纯水，分别在瓶内溶解流动相A1、A2和A3。将溶解后的流动相转移至1L容量瓶中，并用超纯水洗涤瓶壁1-2次。最后，用超纯水定容至1L，混匀并经过022μm有机相膜后待用。

2. 流动相B的配制

取适量超纯水在瓶内溶解流动相B，然后转移至1L容量瓶中，清洗瓶壁1-2次。加入400mL色谱级甲醇和400mL色谱级Y腈，最后用超纯水定容至1L，混匀并经过022μm有机相膜后待用。

3. 超声处理

将配制好的流动相A和B超声处理30分钟，以去除溶剂中的气体，防止阻塞色谱柱。

4. 标准溶液的配制

取一定量氨基酸标准品，用0.1M HCl溶解为100μg/mL或1mM的标准溶液，并过022μm水相膜。

5. 衍生试剂的配制

将60mg试剂一、0.5mL试剂二、45mL试剂三和50μL试剂四混匀，避光待用。此配方可生成约5mL的衍生化试剂，足够进行25次手动衍生；在实际操作中可根据需要调整配制量。

液相色谱仪设置

1. 开机与软件设置

打开电脑和液相色谱仪各模块开关（使用FLD检测器），安装C18色谱柱（46×250mm，耐水性≥90%），打开软件，并在方法组中设置柱温35℃，流速1mL/min，激发波长（λex）340nm，发射波长（λem）450nm，进行60分钟走样。设置完毕后保存方法组。

2. 平衡柱子

在进样前，用初始流动相（流动相A：流动相B=90:10）平衡色谱柱，时间为30分钟或更久，待基线稳定后开始进样。

3. 自动和手动衍生

在自动衍生操作中，吸取氨基酸标准溶液1μL、2μL衍生试剂、2μL试剂三，混合5次，等待1分钟后进样。若仪器不支持自动衍生，可选择手动衍生，将氨基酸标准溶液100μL与200μL衍生试剂和200μL试剂三混合，并经过022μm有机相膜后进行上样。

4. 空白对照实验

实验需同时进行空白对照，使用等量0.1M HCl重复上述步骤，以排除干扰。

检测结果示例

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