尊龙凯时小鼠少突胶质前体细胞培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：小鼠少突胶质前体细胞
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM+10%FBS+1%双抗
传代方法：第一次建议以1:2的比例进行传代，传代情况为2天换液.
备注：请使用无菌离心管收集培养基，为后续对比培养留样。如对比效果不佳，建议直接选购我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，培养至良好状态，灌满完全培养液并密封瓶口为最佳处理方式。收到细胞后需用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后于超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO₂培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，再进行后续处理。可使用显微镜观察细胞生长情况并拍照保存（建议分别拍摄40x、100x、200x倍），前三天的照片可作为售后依据，未提供照片的情况下默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，将瓶中完全培养液收集至离心管中，留下5ml完全培养基并放入37℃、5%CO₂孵箱继续培养。如果细胞密度超过80%，可以进行传代。具体步骤如下：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。若细胞大部分变圆并脱落，快速取回操作台，轻敲培养瓶后加入超过5ml的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，吸出悬液，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液并加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后置于37℃、5%CO₂细胞培养箱中继续培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使其脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如需转入液氮罐，请在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（请佩戴防护面具），迅速置入37℃水浴中解冻，直至无结晶，随后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放于37℃、5%CO₂细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基以继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，有些细胞可能因粘附性不足而发生脱落，这是正常现象。如果脱落较多，请将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。适量加入胰酶进行重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应，离心后重悬并按照1:2比例进行分瓶传代。

五、售后条款

1）关于细胞出现问题的重发情况及判定标准：
- 运输过程中如遇细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等问题，符合条件的可予重发。
- 接收到细胞后48小时内如发现污染问题，请提供真实实验结果，经核实后可重发。
- 常温发货的细胞，在静置24小时后或者干冰速冻的细胞复苏24小时后绝大多数细胞未存活（需提交细胞状态照片）可重发。
- 若细胞活性问题需在收到7天内提出，如用台盼蓝染色法检测细胞活力并经核实后可重发。
- 收到当日及第2、3天需拍照，若未及时告知视为合格产品；如有问题需提供前三天的照片、操作步骤并沟通，经技术人员判定责任的可重发。
2）不予重发的情况包括：
- 客户自行造成的细胞污染或不当操作导致细胞状态不佳的不予重发。
- 使用非本库推荐的培养体系导致细胞状态不佳的不予重发。
- 未能在要求时间内提供细胞培养照片或其他妨碍确认情况的不予重发。