使用血细胞计数器进行细胞计数是一项在体外和体内实验中不可或缺的基础技术。它能够显著提升研究的精确度和可重复性，增强结果的可靠性。无论您研究的领域涉及微生物学、血液学、肿瘤学或其他相关疾病，精确的细胞数目对于任何涉及细胞培养的实验都是至关重要的。

本流程将详细介绍如何有效地使用血细胞计数器进行细胞计数。从样品的准备到使用台盼蓝染色法评估细胞活力，您可以放心地在实验中应用血细胞计数器。

第一阶段：准备血细胞计数器

1. 如果您使用的是玻璃血细胞计数器和盖玻片，请在使用前用酒精进行清洗。润湿盖玻片并将其固定在血细胞计数器上。

2. 如果您选择使用一次性血细胞计数器，则仅需在使用前从包装中取出。

第二阶段：制备细胞悬浮液

在本阶段中，您将需要按照实验要求准备细胞悬浮液。需使用胰蛋白酶和EDTA消化贴壁细胞，并根据需要使用DPBS。

第三阶段：细胞计数

实验步骤：

1. 使用移液器吸取100µL处理后的细胞悬浮液，加入血细胞计数器中。

2. 若使用玻璃血细胞计数器，请轻柔地将液体填充至盖玻片下方的腔室；若使用一次性计数器，请通过毛细管作用将液体吸入计数室。

3. 利用显微镜在10×物镜下对血细胞计数器的网格线进行对焦。

4. 使用手动计数器记录一组16个方格中未染色的活细胞数量（活细胞不吸收台盼蓝）。建议采用固定计数规则，如“记上不记下，计左不记右”。

5. 继续移动血细胞计数器，记录所有4组16个角方块的细胞数，直到完成计数。

第四阶段：计算细胞活力

1. 计算活细胞数/mL：从每组16个角方块中获得平均细胞数，乘以10,000，随后再乘以5，以校正稀释度。最终得出原始细胞悬液中的活细胞数/mL。

例如，如果每个方格中细胞数分别为54、42、49、56，则平均细胞数为：(54 + 42 + 49 + 56) ÷ 4 = 50.25，进一步计算得出原始细胞悬浮液中有501,500个活细胞/mL。

2. 计算细胞活力：若记录下每组16个角方块中活细胞与死细胞的数目，则可以通过将活细胞数和死细胞数相加来获得总细胞数，然后历算活细胞数占总细胞数的百分比。计算公式为：活细胞数 /（活细胞数 + 死细胞数）。

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